D8-MMAE

D8-MMAE是氘代标记的有丝分裂抑制剂MMAE。

信号通路 >> 抗体- 药物偶联物 >> ADC细胞毒素

信号通路 >> 细胞周期/DNA损伤 >> 微管/微管蛋白

信号通路 >> 细胞骨架 >> 微管/微管蛋白

研究领域 >> 癌症

Microtubule[1]

抗体-药物缀合物(ADC)包含具有有效小分子有效负载的靶向抗体。产生ADC以靶向间变性大细胞淋巴瘤细胞系L-82上的不同受体,但递送相同的细胞毒性有效负载(单甲基auristatin E,MMAE),并且释放的MMAE的细胞内浓度与体外ADC介导的细胞毒性相关,而与靶标无关。表达或药物：抗体比率。 LC-MS用于测量具有相同治疗方案的平行L-82肿瘤组中MMAE的浓度。尽管治疗组在给药后3天肿瘤体积没有差异,但肿瘤内MMAE测量显示两种模式。首先,肿瘤内MMAE浓度与ADC剂量成比例增加,这相当于更强的抗肿瘤活性。其次,用cOKT9-vcMMAE和cAC10-vcMMAE处理获得的肿瘤内MMAE浓度在每个剂量下是相似的,与肿瘤对这两种ADC的反应相似的观察结果一致[1]。

肿瘤内MMAE浓度始终与肿瘤异种移植模型中肿瘤生长抑制的程度相关。 IHC分析显示非结合对照治疗的肿瘤由CD30 +和CD30-细胞组成,可能是因为它们不杀死CD30 +或CD30-Karpas 299细胞。在cAC10-vcMMAF处理的肿瘤中仅发现CD30-细胞,说明cAC10-vcMMAF消除了大多数CD30 +细胞。有趣的是,在研究结束时发现cAC10-vcMMAE治疗复发的两种肿瘤也是CD30-,这表明在这两种肿瘤中,一小部分CD30细胞可能已经从旁观者的死亡中逃脱[1]。

在ADC处理后24小时收集细胞沉淀。细胞计数，直径和圆形度在Vi-Cell计数器上测定。进行MMAE提取和定量方法。简而言之，用含有内标的甲醇和乙腈（用于MMAE检测的d8-MMAE和用于MMAF检测的13C-MMAF）均质化肿瘤或细胞沉淀。将匀浆以10,000rpm离心以沉淀蛋白质和蛋白质结合的有效负载。然后将上清液进行固相萃取，通过LC-MS检测MMAE和MMAF的信号[1]。

[1]. Li F, et al. Intracellular Released Payload Influences Potency and Bystander-Killing Effects of Antibody-Drug Conjugates in Preclinical Models. Cancer Res. 2016 May 1;76(9):2710-9.

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