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N-[[4-羟基-2-氧代-1-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-喹啉基]羰基]甘氨酸

用途

IOX2 是一种特异性的脯氨酰羟化酶-2 (PHD2) 抑制剂,IC50 为 22 nM。

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名称

[ CAS 号 ]:
931398-72-0

[ 中文名 ]:
N-[[4-羟基-2-氧代-1-(苯基甲基)-1,2-二氢-3-喹啉基]羰基]甘氨酸

[ 英文名 ]:
IOX2

[英文别名 ]:

QCR-246
CS-0988
IOX2
cc-642

生物活性

[ 描述 ]:

IOX2 是一种特异性的脯氨酰羟化酶-2 (PHD2) 抑制剂,IC50 为 22 nM。

[ 相关类别 ]:

信号通路 >> 代谢酶/蛋白酶 >> HIF/HIF脯氨酰-羟化酶

研究领域 >> 癌症

[ 靶点 ]

IC50: 22 nM (PHD2)[1]

[体外研究]

对于PHD2而言,IOX2至少为2-5000倍选择性,通过IC50值判断,相对于KDM和因子抑制HIF(FIH)[1]。当在常氧和缺氧条件下生长时,IOX2显着上调正常人表皮角质形成细胞(NHEK)和正常人皮肤成纤维细胞(NHDF)中VEGF-A和BNIP3的转录。 IOX2有效促进角质形成细胞和成纤维细胞中的HIF-1α稳定性,核转位和靶基因表达。此外,IOX2显着上调缺氧条件下生长的硫芥(SM)暴露的NHEK和NHDF中VEGF-A和BNIP3的生物合成和转录。这些结果表明,应用IOX2可用于恢复角质形成细胞和成纤维细胞中受SM影响的HIF-1α稳定性和信号传导活性[2]。

[体内研究]

为了研究IOX2作为体内功能性探针的效用,测试IOX2以上调整个生物体中的HIF信号传导,即转基因斑马鱼(Danio rerio)。由于PHD3编码基因的表达受人和斑马鱼中HIF的调节,因此PHD3水平是HIF活性的读数。产生斑马鱼缺氧报道系,其表达具有phd3启动子元件的GFP。用化合物(10μM)处理2天后受精后3天的转基因野生型胚胎相对于对照显示肝脏中phd3：EGFP表达的明显增加。用IOX2观察到GFP水平显着增加[1]。

[激酶实验]

抑制测定在384孔白色ProxiPlates中在10μL反应体积中进行。标准反应混合物由化合物（2％DMSO终浓度），酶混合物（0.001μM的PHD2,10μM的Fe（II），100μM的抗坏血酸盐）和肽混合物（0.06μM的生物素化的C-末端氧依赖性）组成。在50mM HEPES pH 7.5,0.01％Tween-20和0.1％BSA缓冲液中的降解域（CODD）肽，2μM的20G）。将化合物（例如，IOX2）与酶混合物预孵育15分钟，然后在22℃下与肽混合物孵育10分钟。用5μL的30mM EDTA淬灭每个反应。将含有AlphaScreen珠子的珠子混合物与对羟基-HIF1α（Pro564）具有选择性的兔单克隆抗体预孵育1小时，并在22℃下再加入孔中1小时。然后用Envision读板器分析板。使用Prism GraphPad（n≥3）[1]，使用非线性回归计算IC50值，并使用标准化剂量 - 反应拟合。

[细胞实验]

使用VHL缺陷型（具有空载体的肾癌细胞，RCC4）和VHL感受态细胞人胚肾HEK293T，骨肉瘤U2OS和RCC4 / VHLHA（用C末端HA标记的wt VHL稳定转染的RCC4）。用DMSO（对照）和测试的化合物（例如，IOX2）处理细胞（溶解在DMSO中，除了DMOG，其溶解在PBS中并直接添加到培养基中）4-5小时。用针对羟基-Pro564（CODD-OH）和羟基-Asn803（CAD-OH）的抗体探测细胞提取物。 HIF-1α谱带强度用于归一化羟化信号[1]。

[动物实验]

斑马鱼[1] Phd3：gfpsh144 / sh144鱼（Danio rerio）正在生产phd3：gfpsh144 / sh144胚胎，这些胚胎在28℃下在E3培养基中培养。 phd3：gfpsh144 / sh144系是由phd3报告基因GFP构建体的BAC重组产生的缺氧报道系。在受精后3天，将潜在抑制剂（例如，IOX2）以10μM在1％DMSO中的新鲜培养基中添加。将胚胎与化合物一起温育另外48小时。通过浸入三卡因中以5dpf麻醉胚胎。使用荧光解剖立体显微镜（明场和荧光）拍摄胚胎的侧视图像。使用Image J.分析荧光图像。

[参考文献]

[1]. Chowdhury R, et al. Selective small molecule probes for the hypoxia inducible factor (HIF) prolyl hydroxylases. ACS Chem Biol. 2013 Jul 19;8(7):1488-96.

[2]. Deppe J, et al. Impairment of hypoxia-induced HIF-1α signaling in keratinocytes and fibroblasts by sulfur mustard is counteracted by a selective PHD-2 inhibitor. Arch Toxicol. 2016 May;90(5):1141-50.

[相关活性小分子]

二甲基乙二酰氨基乙酸 | PT-2385 | 罗沙司他 | PX-478 | BAY 87-2243 | Vadadustat | 达普司他 | 吡噻硫酮 | 绿原酸 | 3-[[[4-(金刚烷-1-基)苯氧基]乙酰基]氨基]-4-羟基苯甲酸甲酯 | 莫立司他 | 芍药苷 | KC7F2 | 千层纸素A | JNJ-42041935

物理化学性质

[ 密度 ]:
1.5±0.1 g/cm3

[ 沸点 ]:
642.8±55.0 °C at 760 mmHg

[ 分子式 ]:
C₁₉H₁₆N₂O₅

[ 分子量 ]:
352.341

[ 闪点 ]:
342.5±31.5 °C

[ 精确质量 ]:
352.105927

[ PSA ]:
108.63000

[ LogP ]:
1.02

[ 外观性状 ]:
white to beige

[ 蒸汽压 ]:
0.0±2.0 mmHg at 25°C

[ 折射率 ]:
1.689

[ 储存条件 ]:
2-8°C

[ 水溶解性 ]:
DMSO: soluble5mg/mL, clear (warmed)

MSDS

详细MSDS(安全技术说明书)

安全信息

[ 符号 ]:

GHS06

[ 信号词 ]:
Danger

[ 危害声明 ]:
H301

[ 警示性声明 ]:
P301 + P310

[ 危害码 (欧洲) ]:
T

[ 风险声明 (欧洲) ]:
25

[ 安全声明 (欧洲) ]:
45

[ 危险品运输编码 ]:
UN 2811 6.1 / PGIII